使用基于镧系元素掺杂纳米颗粒的侧流免疫测定法快速灵敏地检测抗 SARS-CoV-2 IgG

Learn more about beautiful blog presentation.

2019 年冠状病毒病 (COVID-19) 的爆发对医院实验室来说是一个挑战,因为必须检测大量样本是否存在致病病原体,即严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2)。迫切需要简单快速的免疫诊断方法来识别阳性病例。在这里,我们报告了一种快速灵敏的侧流免疫测定法(LFIA)的发展,该法使用镧系元素掺杂的聚甾烯纳米颗粒(LNP)来检测人血清中的抗SARV-CoV-2 IgG。将SARS-CoV-2的重组核衣壳磷酸蛋白分配到硝酸纤维素膜上以捕获特异性IgG。小鼠抗人IgG抗体用自组装的LNP标记,作为荧光报告基因。该测定使用100 μL等分试样血清样品(1:1000稀释),整个检测过程需要10分钟。验证实验结果符合临床诊断试剂要求。通过测定0个正常样品将值0666.51定义为临界值。我们测试了7个逆转录(RT-)PCR阳性样本和12个阴性但临床怀疑存在抗SARS-CoV-2 IgG的样本。其中一个阴性样本被确定为SARS-CoV-2 IgG阳性,而其他样本的结果与RT-PCR获得的结果一致。因此,该测定可以实现人血清中抗SARS-CoV-2 IgG的快速灵敏检测,并在可疑病例中允许阳性识别;它还可用于监测COVID-19的进展和评估患者对治疗的反应。

注意
本文通过ACS COVID-19子集提供,供不受限制的研究重复使用和分析,以任何形式或任何方式确认原始来源。这些权限是在世界卫生组织 (WHO) 宣布 COVID-19 为全球大流行期间授予的。

2019年2月初,在中国湖北省武汉市发现了严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-<>)感染的肺炎病例。(1)从那时起,2019冠状病毒病(COVID-19)爆发迅速蔓延到全国和世界各地。(2)尽管采取了紧急措施,但目前的局势依然严峻。根据中华人民共和国国家卫生委员会发布的COVID-19报告,中国已诊断出超过70万例COVID-000病例。随着我们对COVID-19临床特征和SARS-CoV-19传播途径的了解增加,已经确定该病毒的潜伏期可能长达2天,并且基本繁殖数(R0= 3.77)。(3,4)早期诊断和治疗对于控制COVID-19疫情至关重要。
需要一种快速准确的实验室方法来诊断 COVID-19,(5)但是,医院的样本数量庞大,情况复杂,带来了重大挑战。(6)建立标本采集和核酸提取标准以及适当的检测环境,正确解读检测结果是医院实验室,特别是资源不足的农村地区实验室面临的主要问题。许多因素可能导致逆转录 (RT-)PCR 的假阴性结果,而 SARS-CoV-2 的首次 RT-PCR 检测的阳性率仅为 70%。(7)
胸部计算机断层扫描 (CT) 正被用作一种确诊方法,用于临床高度怀疑的样本,这些样本通过 RT-PCR 发现 SARS-CoV-2 呈阴性。(8)一种简单快速的 COVID-19 免疫诊断方法将是胸部 CT 的有用辅助或更实用的替代方案。 侧流免疫测定 (LFIA) 等免疫诊断方法具有方便快捷的优点。然而,传统的胶体金基LFIA不具有最佳的性能或定量能力。近年来,已经开发了许多基于荧光的LFIA用于定量或半定量检测,(9−12)但传统的荧光染料并不是理想的报告基因,因为它们容易发生光漂白,稳定性或量子产率差。镧系元素掺杂的聚甾烯纳米颗粒(LNPs)可以克服这些问题,同时保持简单快速检测的优点。(13,14)
已有基于血清中抗 SARS-CoV IgG 检测的 COVID-19 诊断报告。(15,16)监测血清 SARS-CoV IgG 浓度的变化也有助于评估对治疗的反应和预后。(17)高通量测序显示,SARS-CoV-2和SARS-CoV(2003年SARS爆发的致病病原体)之间存在高度相似性。(18)基于这一发现,定量检测抗SARS-CoV-2 IgG用于诊断COVID-19是完全可行的。鉴于缺乏特定药物,恢复期血清和血浆置换可用于治疗 COVID-19,例如 SARS。(19)
在这项研究中,我们报告了一种LFIA的发展,该LFIA使用重组核衣壳磷酸蛋白和自制备的LNP来检测人血清中的抗SARS-CoV-2 IgG。